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造就基
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原代乳腺上皮细胞前提沉编程造就基是一种为推进乳腺原代上皮细胞体表成长而设计的齐全造就基 。它是一种无菌的液体混合系统 ，含有主张细胞成长所必须的氨基酸、维生素、有机和无机化合物以及成长因子等 。该造就基产品是基于碳酸氢盐的缓冲系统 ，在5% CO2/95%空气的造就箱中平衡时 ，pH值约为7.4 。该造就基的配方 ，能够提供一个相宜的营养环境 ，选择性地推进体表人乳腺原代上皮细胞的成长 ，实现体表造就周期短、成本可控、操作便捷的主张 。
使用注明
4℃避光保留1个月内有效 。
1. 乳腺原代上皮细胞的造就
人乳腺组织经消化酶消化后 ，经100微米筛网过滤后计数 ，接种在相宜的造就器皿中 ，参与γ射线辐照后的NIH-3T3细胞 ，原代细胞初次接种后2-3 天勿动（利于细胞贴壁） ，造就过程中若造就基色彩变黄但细胞未长满时可换半液 ，镜下观察细胞未长满但NIH-3T3细胞已不实时 ，适量补充γ射线辐照后的NIH-3T3细胞（通常补加初始数主张一半） 。
2. 乳腺原代上皮细胞的传代
镜下观察细胞形成克隆 ，且聚合度达80~90%时即可传代 。造就箱中取出细胞 ，弃旧造就液 ，0.05%胰酶洗涤30秒后吸尽 ，再参与适量TrypLE™ Express酶(Gibco#12605010) ，37℃孵育 ，10-20 min后拿出轻拍造就瓶/板侧面 ，显微镜下观察细胞消化情况 ；待消化至细胞变圆并起头脱落时用含10%胎牛血清的DMEM造就基终止消化 ，并将细胞转移至离心管中 ，300g ，5 min离心 ；弃上清 ，以1-2 mL本细胞造就基产品沉悬细胞 ，活细胞计数 ，将细胞悬液按适合的细胞密度接种于造就瓶/板 。之后 ，参与γ射线辐照后的NIH-3T3细胞 ，在造就板/孔中补加乳腺原代上皮细胞造就基至所需体积 ，轻轻摇摆混匀 ，表表消毒后置造就箱 ，37 ℃ 、5 % CO2前提造就 。其他步骤同上 。
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货号： PRS-BCM-2D
货号： PRS-BCM-3D
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